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设计引物序列的主要依据
引物设计
有哪些
主要
因素?
答:
① 特异性:引物应在保守区内设计并具有特异性
,引物与非特异扩增序列的同源性不要超过70%或有连续8个互补碱基同源。②
引物长度
: 一般在15~30碱基之间 ,引物有效长度Ln=2(G+C)+A+T,Ln值不能大于38。(Ln>38时,最适延伸温度会超过Taq DNA聚合酶的最适温度74℃,不能保证产物的特异性)③...
用PCR技术扩增血清蛋白基因
设计引物序列的主要依据
是什么?
答:
首先要知道血清蛋白基因的序列。引物本质是与目的基因两端序列互补的一小段单链DNA。所以,
其主要依据就是目的基因两端的碱基排列顺序
。
引物设计的
时候要根据特异性核苷酸
序列
为什么不是碱基排列顺序?_百度...
答:
1、引物长度:引物长度应该足够长
,能够提高特异性,但又不能过长,否则会降低扩增效率和特异性。2、引物序列:引物序列应该与目标DNA区域的
特异性核苷酸序列
匹配,以确保扩增出来的产品仅与目标DNA区域相对应,并且不会扩增出与其他非目标DNA区域相似的产物;3、引物温度:应根据引物序列的特性设定适当的扩...
酶切位点,保护碱基,kozak序列
,这些
引物设计
要素你掌握了么
答:
设计引物时,
上游引物通常包括起始密码子前面的保护碱基、酶切位点、Kozak序列、ATG以及一小段目标基因片段
。下游引物则无需Kozak序列,包括保护碱基、终止密码子(可能还有表达标签序列)和目标基因片段。这些引物的长度较长,通常超过40bp,但只要设计得当,就能在PCR反应中顺利产生。实战演练中,以将Stat5a...
怎么
设计引物
答:
长
。引物需要足够长,保证序列独特性,并降低序列存在于非目的序列 位点 的可能性。但是 长度 大于24核苷的引物并不意味着更高的 特异性 。较长的序列可能会与错误配对序列杂交,降低了特异性,而且比短序列杂交慢,从而降低了产量。Tm值在55-65℃(因为60℃ 核酸外切酶 活性 最高),GC含量在40%-60...
设计
定量
引物的
参考
序列
是什么
答:
目的基因的mRNA。1、定量
引物序列
与目标基因的外显子区域相结合,可以通过PCR扩增目标基因的特定片段。2、实时荧光定量PCR技术进行定量分析,可以准确地检测和计算起始模板数量。3、
设计
定量引物序列需要考虑引物的特异性和扩增效率,以确保准确的定量结果。
引物设计
原则是什么?
答:
1、引物与模板的
序列
要紧密互补。2、引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构。3、再次引物不能在模板的非目的位点引发DNA聚合反应(即错配)。二、PCR
引物设计的
目的是找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列。如前述,引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。对
引物的设计
不...
引物的设计
原则
答:
4、引物自身:不能含有自身互补
序列
,否则会形成发夹样二级结构。5、引物之间:两个引物之间不应有多于4个的互补或同源碱基,不然会形成引物二聚体,尤应避免3’端的互补重叠。6、上下游
引物的
互补性:一个引物的3‘末端序列不允许结合到另一个引物的任何位点上。7、3’末端:如果可能的话,每个引物...
引物设计
原理的原理
答:
1、 择合适的靶序列:设计引物之前,必须分析待测靶序列的性质,选择高度保守、碱基分布均匀的区域进行引物设计。2、 长度:一般来说,寡核苷酸
引物长度
为 15~30bp。3、 Tm 值:引物的 Tm 值一般控制在 55~60℃,尽可能保证上下游引物的 Tm 值一致,一般不超过 2℃。若引物中的 G+C 含量相对...
如何
设计引物
答:
(6)上下游
引物的
互补性:一个引物的3‘末端
序列
不允许结合到另一个引物的任何位点上。(7)3’末端:如果可能的话,每个引物的3‘末端碱基应为G或C。(8)引物应当超出限制性内切酶识别位点至少3个核苷酸。2、探针
设计
原则:(1)靶基因的确定:选择检测组共有的基因以避免检测的假阴性(漏检)。...
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