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反转录试剂可以预混吗
逆
转录
时
试剂
没混匀
答:
会出现起泡现象。RT-PCR的
试剂
都应在冰上融化,等完全融化后再取;用过的试剂应瞬间离心后放回-20℃保存;试剂应按顺序加,加完后再混匀离心。使用ReverTra-Ace、RNase-Inhibitor等酶类时,没有混匀,会出现起泡现象;由于酶保存液中含有50%的甘油,粘度高,分取时应慢慢吸取。
逆
转录试剂
混合液配好后一段时间后还
可以
用吗
答:
可以用
。逆转录试剂混合液配好后一段时间后稀释在低温(2至10°C)储存下的溶液为三个月的有效期,逆转录试剂混合液配好后一段时间后还可以用。逆转录预混液是一款快速方便、减少污染的一链cDNA合成试剂盒。
如何避免荧光定量pcr检测技术的实验误差
答:
得到的RNA立即
反转录
为cDNA,RNA样品最好不要存放。对于精度要求较高的定量PCR,最好先在样品的所有组织类型内做内参基因的稳定性分析,找到表达恒定基因作为内参。做定量PCR时,先把除模板外的所有
试剂预混
,然后分装到PCR管中,分装时尽量采用排枪,加样时尽量采用排枪。体系中最好参入ROX参比荧光,消...
RT -PCR的
试剂
准备
答:
1.RNA提取
试剂
2.第一链cDNA合成试剂盒3.dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM4.Taq DNA聚合酶
请教:提取RNA 和
反转录
的操作注意事项
答:
你按照买的
反转录试剂
盒来做就行.(1)、从细胞中提取细胞总RNA 用GIBCO公司的Trizol试剂提取细胞总RNA.按试剂使用说明操作:离心收集细胞,倾去细胞液,向沉淀中加1 ml Trizo1(每106-107细胞),混匀至室温5分钟,用1 ml加样器反复吹打,直至细胞完全裂解成均一溶液,不粘稠时为止.随后加入200ul氯仿,...
RNA的提取和
反转录
的实验步骤?
答:
4 混匀,冰浴30min。5 4℃,12000rpm,10min。6 上清至另一离心管中 加0.4Ml氯仿,剧烈震荡。冰浴放置5min。 去脂类。7 40C,12000rpm,10min。8 弃有机相(下层) 加入0.4Ml氯仿和0.4Ml酚。室温放置5min。 去脂类和蛋白质。9 40C,12000rpm,10min 弃有机相,加入等体积异丙醇。-200C...
RT-PCR实验案例解析—钟鼎生物
答:
使用TRIzol提取样品总RNA,
反转录
获得cDNA,供下游实验使用。1.
试剂
与耗材 试剂与耗材 Prime Script II 1st Strand cDNA Synthesis Kit,宝生物工程(大连)有限公司,6210B;总RNA提取试剂TRIzol,南京钟鼎生物技术有限公司,RK01-100;DL2000 DNA Plus Marker(100、250、500、750、1000、1500、2000 bp...
pcr
试剂
盒放在4℃还
可以
使用么
答:
这样相当于试剂盒多使用了5倍,结果绝对没影响.主要有: 1.磁珠法核酸提取试剂盒2.磁珠法提取DNA试剂盒3.DNA提取试剂盒(离心柱法)4.磁珠法RNA提取试剂盒5.RNA提取试剂盒(离心柱法)6.磁珠法植物基因组DNA提取试剂盒7.
反转录试剂
盒8.胶回收试剂盒9.PCR纯化试剂盒10.病毒核酸提取试剂盒 ...
PT-PCR操作流程
答:
是为10p mol / μl 浓度的引物溶液 八、PCR产物电泳 先将1-10μl左右PCR产物,加已点在纸上的溴酸兰,反复吸打混匀后进行电泳,一般电流为10mA,电源100V,电泳30分钟,紫外灯下观察,满意的结果扫描打印。九、几个注意点:1、逆
转录
的关键步骤是立即冰水浴?2、Rt时,先打开PCR预热30分钟。
RT-PCR实验操作的注意事项
答:
⑴在冰浴离心管里面加入模板RNA 4uL,引物2uL,去离子水5uL,混匀,离心3-5秒;⑵70度水浴5分钟,冰浴30秒(此处是为了使引物和模板正确配对);⑶加入5×反应液4uL,RNase抑制剂1uL,dNTP 2uL(这些应该先配好,然后分再装到每一管),混匀;⑷37度水浴5分钟,加入1uL AMV-RT
反转录
酶,混匀;⑸37度水浴1小时(此...
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